Trypsin 0.25% 胰酶-EDTA的配制

配方: 100ml PBS, 0.25g胰酶

步骤:

1 先配100mL PBS,用NaHCO3调节pH
2 称胰酶0.25g(胰酶的分子量:23800.0,摩尔浓度为:0.105mM)
3 加入PBS中, 低速搅拌 <4h 冰浴中或者4C过夜,低速搅拌0.5h冰浴中
4 调PH7.4,仍在冰浴中
6 过滤,分装,-20C保存,4C短期内保存

Note:低速很重要,机械搅拌对酶是-种冲击,如果起沫,酶就变性了。低温,防止酶失活,对难消化的细胞:在上述配方中,加入0. 02g的EDTA(O.02%),因为EDTA可以络合Ca2+,增加消化效力。

PBS的配方:

Components
Inorganic Salts
Molecular WeightConcentration (mg/L)mM
Potassium Chloride (KCl)75.0400.05.3333335
Potassium Phosphate monobasic (KH2PO4)136.060.00.44117647
Sodium Bicarbonate (NaHCO3),调节pH84.0350.04.1666665
Sodium Chloride (NaCl)58.08000.0137.93103
Sodium Phosphate dibasic (Na2HPO4-7H2O)268.090.00.33582088

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