在PBS中制备4%甲醛溶液的方案

IHC / ICC的绝大多数程序都使用基于甲醛的固定剂来固定组织和细胞。以下方案描述了在PBS中生成4%甲醛溶液的技术。最有效的固定剂必须通过实验确定。

注意:甲醛是有毒的。使用此化学品前,请先阅读MSDS。应戴上手套和安全眼镜,并在通风橱内配制溶液。

在开始实验之前,请完整阅读本手册。
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所需试剂

  • 去离子水H2O
  • HCl(稀)
  • 氢氧化钠(1 N)
  • 多聚甲醛粉
  • 1X PBS:0.145M NaCl,0.0027M KCl,0.0081M Na2HPO4,0.0015M KH2PO4,pH 7.4

用料

  • 过滤单元
  • 玻璃器皿和搅拌棒(专用于甲醛溶液)
  • 手套和护目镜
  • 带电磁搅拌器的热板
  • 温度计
  • 通风罩

步骤

  1. 对于1 L的4%甲醛,将800 mL 1X PBS加入通风橱中的搅拌板上的玻璃烧杯中。在搅拌的同时加热到大约60°C。注意解决方案不会沸腾。
  2. 将40 g多聚甲醛粉末加到加热的PBS溶液中。
  3. 粉末不会立即溶解到溶液中。通过从移液管中逐滴添加1 N NaOH直至溶液澄清,缓慢提高pH值。
  4. 一旦多聚甲醛溶解,应将溶液冷却并过滤。
  5. 用1X PBS将溶液的体积调节至1L。
  6. 重新检查pH值,并用少量稀HCl调节至大约6.9。
  7. 可以将溶液等分并冷冻或在2-8°C下保存长达一个月。

多聚甲醛,甲醛和福尔马林之间的区别

多聚甲醛(化学名称为聚甲醛)是一种聚合甲醛粉末,其本身无法固定组织。为了用作组织固定剂,必须将多聚甲醛溶于热水以变成甲醛溶液。福尔马林是在水中的饱和甲醛溶液(按重量计37%,按体积计40%),含10-15%的甲醇。加入甲醇以减慢聚合成甲醛的速度,从而降低了福尔马林的固定能力。福尔马林也可以由粉末状的多聚甲醛制成无醇形式。

来自:R&D Systems,阅读英文原文手册

https://www.rndsystems.com/cn/resources/protocols/protocol-making-4-formaldehyde-solution-pbs

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