冰冻切片的免疫染色方案 abcam

冰冻切片免疫染色方案方法 

第 1 天 

  1. 固定: 
    • 在4% PFA(4g多聚甲醛溶于100ml PBS 中)中固定6-20小时。 
  2. 蔗糖脱水: 
    • 在30%蔗糖中放置2天。 
  3. OTC包埋及冰冻切片制备(10 um)。 
  4. 用TBST洗涤3次。 
  5. 抗原修复: 
    • 将柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)置于微波炉中加热至98°C,并维持20分钟。 
    • 而后冷却至室温(10-20 分钟)。 
  6. 用TBS冲洗后,再洗涤两次,每次5 分钟。 
  7. 在含0.1%吐温20、10%山羊血清、1% BSA及0.3M甘氨酸的TBS中封闭。 
  8. 使用TBS稀释一抗,在4°C条件下孵育过夜。 
    • 将一抗稀释至厂家推荐的浓度或采用梯度稀释测定的最佳浓度。建议进行浓度梯度测试。 

第 2 天 

  1. 用TBST冲洗两次后,再冲洗3次,每次10分钟。 
  2. 使用TBS稀释二抗,室温下孵育1小时。 
  3. 在摇床上用 TBST 洗涤玻片3次(每次3分钟)。 
  4. 用封片剂进行封片。 

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