细胞免疫荧光(ICC/IF)实验流程

  1. 试剂 

清洗缓冲液,4%多聚甲醛,100%甲醇,0.1% Triton X-100,封闭液,荧光二抗,抗荧光淬灭封片剂。 

  1. 实验步骤 

2.1 固定 

     2.1.1 在12孔细胞培养板中培养细胞,使细胞贴附生长于培养板底部的玻片上。 

     2.1.2 移除培养板内的细胞培养液,用清洗缓冲液清洗细胞1次。 

     2.1.3 在培养板内加入4%多聚甲醛,室温固定20min,或者100%冰甲醇固定5min。 

     2.1.4 用清洗缓冲液清洗细胞3次。 

2.2 通透 

     2.2.1 用0.1% Triton X-100通透细胞,室温孵育5min。 

     2.2.2 用清洗缓冲液清洗细胞2次。 

2.3 封闭 

     2.3.1 在培养板内加入封闭液,室温封闭1h。 

2.4 染色 

     2.4.1使用PBS稀释液稀释一抗。 

     2.4.2 将稀释好的一抗加至培养板中,2℃~8℃孵育过夜。 

     2.4.3 用清洗缓冲液清洗细胞3次。 

     2.4.4 将稀释好的荧光二抗和DAPI加至培养板中,室温避光孵育45min。 

     2.4.5 用清洗缓冲液清洗细胞3次。 

     2.4.6 用抗荧光淬灭封片剂封片并避光保存。 

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